琼脂糖水平电泳仪:什么是核酸电泳?
2022-06-22 11:05:00
琼脂糖水平电泳仪:什么是核酸电泳? 核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质。琼脂糖是一种聚合链线性分子;聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(Acr)在 N,N,N′-四甲基乙 二胺(TEMED)和过硫酸铵(AP)的催化下聚合形成长链,并通过交联剂 N,N′-亚甲双丙烯酰胺(Bis)交叉连接而成。琼脂糖凝胶适合分离200bp至近50kb的DN 片段,而聚丙烯酰胺凝胶对于小片段(5bp-500bp)的分离效果很好,且分辩力极高。选择不同浓度的凝胶,可以分离丌同大小范围的 DNA 分子。电场强度愈大,带电颗粒的运动赹快。但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小,所以电泳时一般采用低电压,不超过 6V/cm。而对于大片段电泳,可以选择 0.5-1.0V/cm 电泳过夜。如果选择高电压电泳,可使用聚丙烯酰胺凝胶。 核酸电泳常采用TAE、TBE、TPE三种缓冲系统。TAE价格低廉,但缓冲能力低。TPE在进行DNA回收时,会使DNA污染磷酸盐,影响后续反应。所以综合考虑,多采用TBE缓冲液。 核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭(EB)。溴化乙锭是一种扁平分子,可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。